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shRNA表达载体构建服务

发布时间:2015-10-13 [返回]


shRNA(short hairpin RNA ),即短发夹RNA,通过细胞内的酶切机制可以产生成熟的siRNA,后者与RNA诱导的沉默复合物(RISC,RNA-induced silencing complex)能高效特异性地降解靶基因的mRNA。此即为特异性沉默特定基因表达的RNAi技术。与化学合成siRNA相比,载体shRNA克隆具有效率高、作用持久、稳定性好、毒性小等优点。

技术流程:
1.设计RNAi序列与合成:一般至少设计3条,并安排合成
2.正反链进行退火
3.用BglII和XhoI双酶切载体。
4.酶连与转化实验
5.转染细胞(及RNA干扰效率检测)


(转染效果图例)


安提海拉的优点:
1.沉默效果保证:每个基因设计3个针对靶基因的shRNA确保1个至少有70%的沉默效果
2.多种报告基因:GFP、RFP或puro等
3.有多种交货形式:普通载体、慢病毒载体等

您需要提供的材料:
1. 目的基因的相关信息
2. 载体类型
 
您将获得的结果:
实验报告:包括序列信息、测序引物、所用酶切位点信息等;
测序结果:测序峰图、序列文件;
构建好的shRNA套装(有3个质粒)和阴性对照质粒组(有3个)及含相应质粒的穿刺菌保等。


服务承诺:
1.本公司承诺,如客户订购针对某个基因的安提海拉公司的shRNA克隆套装(3条shRNA), 则本公司保证其中至少有一条shRNA是有效的,其干扰效率大于70% 。在目的细胞转染效率大于80% ,且客户检测shRNA有效性的实验方法恰当、操作正确的前提下,如果没有达到上述标准,则本公司将全额退还客户己付款项;
2.如果shRNA序列由客户自己设计,本公司只负责成功构建shRNA表达载体,对其中shRNA的干扰有效性不做任何保证;
3.如果客户订购的shRNA条数在三条以下,本公司不保证设计的shRNA一定有效;
4.如果客户需委托本公司完成shRNA的有效性验证实验,则需加收验证部分的实验费用。


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