荧光定量PCR 技术,是通过在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,对起始模板进行定量分析的方法，可对初始模版进行绝对定量和相对定量。常用的实验方法有SYBR Green I 法和TaqMan探针法。荧光定量PCR 可用于mRNA 表达量水平检测、MicroRNA 表达量水平检测、RNAi效率检测和基因拷贝数检测。

    SYBR Green I 法中，荧光染料SYBR Green I结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的，产生绿色荧光。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。

    TaqMan探针法中，TaqMan荧光探针是一种由双基团标记的RNA探针，其中荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭基团cu mie则在3’末端。PCR扩增时，加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5 －3 外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM，TET，VIC，HEX。

技术流程

1、引物的设计与合成：根据客户的目的基因序列设计特异性的引物（或由客户自行提供），并选择适宜的内参基因及引物；
2、抽提DNA/RNA：抽提RNA定量并逆转录合成cDNA（测DNA拷贝数时直接定量）；
3、Q-PCR预实验；
4、定量PCR正式实验；

5、结果及数据分析。

服务内容

•基因组DNA水平基因拷贝数检测

•转录组mRNA水平基因拷贝数检测

•转录组microRNA水平基因拷贝数检测

•RNAi效率检测

客户提供材料

•细胞：细胞数>106；

•组织：总量>100 mg；

•DNA 或RNA 样品：总量>2 μg；

•靶基因信息：包括基因序列或GenBank Accession Number 等；

•背景资料：包括生物物种信息（Human、Mouse、Rat 等）、DNA/RNA 来源、基因丰度等。